مصنوعات

پروٽوم-وائڊ فاسفوريليشن واقعن جو تجزيو اڃا تائين هڪ اهم تجزياتي چئلينج آهي ڇاڪاڻ ته پروٽين فاسفوريليشن نيٽ ورڪ جي وڏي پيچيدگي جي ڪري.هن ڪم ۾، اسان ليس-اين، ليس-سي، ۽ ٽرپسن جي مڪمليت جو جائزو وٺون ٿا انهن جي صلاحيت جي حوالي سان فاسفوپروٽووم جي عالمي تجزيي ۾ حصو وٺڻ جي.گھٽ پي ايڇ مضبوط ڪيشن ايڪسچينج جو هڪ بهتر نسخو استعمال ڪيو ويو موثر طور تي الڳ ڪرڻ لاءِ N-terminally acetylated, phosphorylated, and nonmodified peptides.مجموعي طور تي 5036 غير ضروري فاسفوپيپٽائڊس جي سڃاڻپ ٿي سگھي ٿي <1٪ جي غلط دريافت جي شرح سان 1 mg پروٽين مان ٽن اينزائمز جي ميلاپ کي استعمال ڪندي.اسان جي ڊيٽا انڪشاف ڪيو ته فاسفوپيپٽائيڊ ڊيٽا سيٽن جي وچ ۾ اوورليپ مختلف پروٽيز سان پيدا ٿيل حد کان گهٽ هئي، جڏهن ته ٻه ساڳيا ٺاهيل ٽرپٽيڪ ڊيٽا سيٽ جي وچ ۾ اوورليپ گهٽ ۾ گهٽ 4 ڀيرا وڌيڪ مليا ويا.اهڙيءَ طرح، Lys-N ۽ trypsin جو متوازي استعمال 72 سيڪڙو اضافو ڪيو فاسفوپيپٽائڊس جي تعداد ۾ 72 سيڪڙو اضافو جيئن d جي مقابلي ۾ اڪيلو ٽرپسن جي ڀيٽ ۾، جڏهن ته ٽرپسن جي نقل ڪرڻ جو تجربو صرف 25 سيڪڙو واڌ جو سبب بڻيو.اهڙيء طرح، جڏهن صرف ٽرپسن ۽ Lys-N ڊيٽا تي ڌيان ڏيڻ، اسان 4671 غير ضروري فاسفوپيپائيڊس جي سڃاڻپ ڪئي.معلوم ڪيل سائيٽن جي وڌيڪ تجزيي مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته Lys-N ۽ trypsin ڊيٽا سيٽن کي خاص طور تي مختلف فاسفوريليشن نقشن ۾ وڌايو ويو آهي، وڌيڪ واضح ڪيو ويو آهي ته ملٽي پروٽيز طريقا فاسفوپروٽوم تجزين ۾ تمام قيمتي آهن.