مصنوعات

خاص طور تي 5-fluorouracil (5-FU) ۽ ٻه endogenous monophosphate nucleotides جي ڪيترن ئي ميٽابولائٽس کي مقدار ڏيڻ لاء، اسان هڪ مائع ڪروميٽوگرافي-ٽينڊم ماس اسپيڪٽروميٽري (LC-MS/MS) جي بنياد تي هڪ اصل طريقو ٺاهيو.ھن جائزي ھيٺ ڏنل تعين جي اجازت ڏني: (i) 5-FU يا 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) مان 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) جي اندروني پيداوار. ، (ii) intracellular 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) تناسب تي 5-FdUMP ڪنسنٽريشن جو اثر، ۽ (iii) 5-FdUMP جي secretion جي حد ۽ 5-اي بي سي ٽرانسپورٽرز پاران انساني ثقافتي سيلز مان FU.اسان جي تجرباتي حالتن جي تحت، سيلز 5-FU يا 5-FUrd سان ڀريل هئا.ان کان پوء، سيلولر پروٽينن کي ميٿانول طرفان وڌايو ويو.هن طريقيڪار اعلي extraction وصولي ڏني.ان کان علاوه، سيلز مان 5-FU ۽ 5-FdUMP secretion کي ماپڻ لاءِ، اسان ڪلچر وچولي ۾ انھن ماليڪيولن جي مقدار کي وڌايو.ميڊيا يا ته سڌي طرح انجيڪشن (5-FU) هئا يا هيٺ هليا ويا هڪ مضبوط مرحلو نڪتل Oasis Wax Extract Cartridge (5-FdUMP).تجزيي جي علحدگي dC18 Atlantis 3.5 μm، (100 mm × 2.1 mm id) ڪالمن تي اسڪوڪريٽڪ موڊ سان امونيم فارميٽ بفر / ميٿانول / پاڻي (5/5/90، v/v) استعمال ڪندي موبائل مرحلي جي طور تي ڪيو ويو.هلائڻ جو وقت 6.2 منٽ کان وڌيڪ نه هو.تجزيي کي منفي آئن موڊ جي تحت اليڪٽررو اسپري انٽرفيس ۾ آئنائيز ڪيو ويو.اسان مرڪب جي مطابق 2.5-150 ng mL −1 جي حد تائين طريقي جي تصديق ڪئي.Intra- ۽ Inter-assay variability 10 سيڪڙو کان گهٽ هئي ستن ڏينهن دوران.سڀئي مرکبات سيلز ۾ يا ڪلچر وچ ۾ مستحڪم هئا جڏهن نمونن کي گهٽ ۾ گهٽ ٻن هفتن تائين −20 °C تي ذخيرو ڪيو ويو، ۽ ٽن منجهيل-thw چڪر کان پوء.ٻنهي ميڊيا ۾ ڪوبه ميٽرڪس اثر نه ڏٺو ويو.